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离心机在微生物实验实验中的地位这么高

发布时间:2021-01-21点击量:11

离心机在微生物实验中得地位多高,可以用这么一句话来说——没用离心机恐怕完成不了实验!

比如原代细胞的提取,有一个悬浮细胞的分离方法:

1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,离心机1000rpm/分钟离心5分钟。

2、去掉上清,离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后离心机1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。

3、用培养基重悬,调整适当细胞浓度后分瓶培养。

4、如选用悬液中某种细胞,可采用离心后的细胞分层液收获目的细胞。

再比如细胞悬液机械裂解后有很多细胞碎片,如何去掉这些碎片呢?我们先来看看各种方法:

1.采用稀释法。细胞稀释后还能增殖,会越来越多,而细胞碎片相应地会越来越少。

2.还有自然沉降法。细胞要比大多数碎片沉降得快一些::将细胞悬液移到离心管中,等细胞大部分下沉时,可将上液吸弃,再加入培养液悬浮细胞,此方法可反复使用,同时每次可显微镜下观察是否符合你的要求。

3.低速离心机可以去除碎片,一般700g,5mins

4.离心的时候,在细胞数足够的条件下,减少离心时间,如平时5min,1000rpm,改为3min,1000rpm,去上清,因为坏死和碎片一般都在上清里!这样的操作只需要在孵育前洗涤过程中操作一次就可以了!

虽然细胞碎片清除办法很多,但是你会发现,用离心去除是众多办法里面效率最高的!

而且植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。细菌细胞的破碎比较麻烦,因为整个细菌细胞壁的骨架实际上是一个借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子,非常坚韧。破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎,与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后,选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用离心机或过滤的方法除去。
文章来自:http://www.lygdb.com.cn


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